四川农业大学学报 ›› 2015, Vol. 33 ›› Issue (01): 13-21.doi: 10.16036/j.issn.1000-2650.2015.01.003
花生光敏色素AhphyA和AhphyB基因的克隆及原核表达研究
张烨1,2, 赵术珍1, 王江山1, 夏晗1, 侯蕾1, 任丽3, 王兴军1,2
- 1. 山东省农业科学院生物技术研究中心, 山东省作物遗传改良与生态生理重点实验室, 济南 250100;
2. 山东大学生命科学学院, 济南 250100;
3. 开封农林科学研究院, 河南 开封 475004
Cloning and Prokaryotic Expression of PhytochromeA and PhytochromeB from Peanut
ZHANG Ye1,2, ZHAO Shu-zhen1, WANG Jiang-shan1, XIA Han1, HOU Lei1, REN Li3, WANG Xing-jun1,2
- 1. Bio-Tech Research Center, Shandong Academy of Agricultural Sciences, Shandong Provincial Key Laboratory of Crop Genetic Improvement, Ecology and Physiology, Jinan 250100, China;
2. Life Science College of Shandong U-niversity, Jinan 250100, China;
3. Kaifeng Research Academy of Agriculture and Forestry, Kaifeng 4~5004, He'nan, China
摘要： [目的] 克隆了花生(Arachis hypogaea L.)的2个光敏色素基因,并对其进行生物信息学分析,构建这2个基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达蛋白,为进一步纯化蛋白制备抗体以及研究这2个基因在花生发育中的作用奠定基础。[方法] 首先,根据花生转录组中编码光敏色素A基因与光敏色素B基因的部分序列,以花生叶片中提取的总RNA为模板,通过RT-PCR与RACE技术对这2个基因的全长ORF序列进行克隆;然后,使用MEGA软件分析花生光敏色素与其他物种中光敏色素的亲缘关系;构建AhphyA、AhphyB的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21并诱导蛋白表达。[结果] 2个基因全长ORF分别为3378bp和3456bp,分别编码1125和1151个氨基酸的蛋白;其氨基酸序列与大豆的光敏色素A蛋白和光敏色素B蛋白的相似性分别为88%和90%;经SDS-PAGE检测,在大肠杆菌中2个基因均能受IPTG诱导表达产生蛋白。[结论] 利用RT-PCR与RACE技术从花生中克隆得到了2个光敏色素基因,成功构建了原核表达载体,并使其在大肠杆菌中得到了高效表达。
中图分类号:
- S565.2
