四川农业大学学报 ›› 2011, Vol. 29 ›› Issue (02): 213-217.

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长喙田菁植物螯合肽合成酶PCS1的原核表达及纯化

李安明1,邓青云2,李德华2   

  1. 1. 孝感学院生命科学技术学院
    2. 孝感学院
  • 收稿日期:2011-03-16 修回日期:2011-04-10 出版日期:2011-06-30 发布日期:2011-06-30
  • 通讯作者: 李安明
  • 作者简介:李安明(1968-),男,湖北孝感,讲师,博士,主要从事基因工程及提高植物修复能力的基因工程研究。通讯地址:湖北省孝感市交通大道272号孝感学院生命科学技术学院,邮编:432000;E-mail: Lsahmp68@yahoo.com.cn,
  • 基金资助:
    湖北省重点(培育)学科: 农业资源利用;湖北省自然科学基金项目

Expression and Purification of Sesbania rostrata phytochelatin synthase1 in Escherichia coli

  • Received:2011-03-16 Revised:2011-04-10 Online:2011-06-30 Published:2011-06-30
  • Contact: li an ming
  • About author:
    李安明(1968-),男,湖北孝感,讲师,博士,主要从事基因工程及提高植物修复能力的基因工程研究。通讯地址:湖北省孝感市交通大道272号孝感学院生命科学技术学院,邮编:432000;E-mail: Lsahmp68@yahoo.com.cn,

摘要: 为了获得纯化的长喙田菁(Sesbania rostrata)植物螯合肽合成酶PCS1,本研究以原核表达载体pMAL-c2x为基础,构建了含有SrPCS2开放阅读框序列的原核表达载体pAM56, 并将其转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3), 对融合蛋白的表达进行了优化, 通过Western blotting鉴定融合蛋白,且用麦芽糖亲和柱对MBP-SrPCS1融合蛋白进行了纯化。本研究结果表明:在15℃下,经0.2 mmol / L IPTG诱导16小时表达出可溶性的MBP-SrPCS1融合蛋白,并通过亲和层析得到了纯化的MBP-SrPCS2融合蛋白,为进一步研究SrPCS1的活性及PCS的催化机制奠定了基础。

关键词: 植物螯肽合成酶,SrPCS1, 原核表达, 纯化

Abstract: In order to obtain purified Sesbania rostrata phytochelatin synthase1. The prokaryotic expressing vector pAM56 containing SrPCS1 open reading frame was constructed on the base of pMAL-c2x and transferred into E. coli BL21 (DE3), then the fused protein MBP-SrPCS1 was induced, identified by western blotting and purified through Maltose Binding column. The results suggested that the soluble fusion protein MBP-SrPCS1 was expressed at high levels 16 h after 0.2 mmol/L of IPTG induction (15℃) and the purified MBP-SrPCS1 achieved by affinity chromatography. It lays the foundation for the further study on the enzyme activity of SrPCS2 and the catalytic mechanism of PCS.

Key words: phytochelatin synthase, SrPCS1, prokaryotic expression, purification