天府肉鹅IFN-α成熟肽基因的原核表达及抗病毒活性

doi:10.3969/j.issn.1000-2650.2011.02.025

四川农业大学学报 ›› 2011, Vol. 29 ›› Issue (02): 269-273.doi: 10.3969/j.issn.1000-2650.2011.02.025

天府肉鹅IFN-α成熟肽基因的原核表达及抗病毒活性

刘菲^1,2, 高丽芹¹, 程安春^1,2, 汪铭书^1,2, 韩清林^1,3, 赵婷婷¹, 唐卫杰¹, 严晓玲¹

1. 四川农业大学动物医学院, 四川雅安 625014;
2. 动物疫病与人类健康四川省重点实验室, 四川雅安 625014;
3. 四川省大英县畜牧局, 四川大英 629118

收稿日期:2011-02-27 出版日期:2011-06-30 发布日期:2017-04-11
基金资助:
四川省教育厅自然科学重点项目(2006A012);教育部"长江学者和创新团队发展计划"创新团队项目(IRT0848);现代农业产业技术体系建设专项资金(nycytx-45-12)

Prokaryotic Expression of Tianfu Goose IFN-α Mature Peptide and its Activity Against Virus

LIU Fei^1,2, GAO Li-qin¹, CHENG An-chun^1,2, WANG Ming-shu^1,2, HAN Qing-lin^1,3, ZHAO Ting-ting¹, TANG Wei-jie¹, YAN Xiao-ling¹

1. College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University, Yaan 625014, Sichuan, China;
2. Key Laboratory of Animal Disease and Human Health of Sichuan Province, Yaan 625014, Sichuan, China;
3. Bureau of Animal Husbandry of Daying Country of Sichuan Province, Daying 629118, Sichuan, China

Received:2011-02-27 Online:2011-06-30 Published:2017-04-11

摘要/Abstract

摘要： 参照已克隆的天府肉鹅IFN-α完整ORF基因序列设计引物,克隆成熟肽基因,与载体pET32a连接,构建原核表达载体,并在表达菌Rosetta中表达,SDS-PAGE分析鉴定,通过Ni-IMAC亲和层析纯化和稀释透析复性后,采用微量细胞病变抑制法分析测定IFN的抗病毒活性。结果显示,IFN-α成熟肽基因全长486 bp,共编码161个氨基酸;成功构建了原核表达载体pET32a-mGoIFN-α并得到表达,SDS-PAGE和Western-blot分析表达蛋白的大小为38 ku;纯化复性后的表达蛋白抗水泡性口炎病毒(VSV)活性的比活力为5.52×10³U/mg,表明重组蛋白具有良好的抗病毒活性。

关键词: 天府肉鹅, α干扰素, 原核表达, 抗病毒活性, 水泡性口炎病毒

Abstract: A primer was designed reference to the complete ORF of Tianfu goose IFN-α, the mature peptide was cloned and connected into pET32a to construct the prokaryotic expression vector.Then the IFN-α gene was expressed in Rosetta and identified by SDS-PAGE.After the expressed protein was purified by Ni-IMAC affinity chromatography and dialyzed to renaturation, its antiviral activity was determinated by micro cytopathic effect inhibition.The results revealed that IFN-α mature peptide gene was 486 bp and encoded a polypeptide of 161 amino acid.The prokaryotic expression vector pET32a-mGoIFN-α was constructed successfully and the gene was expressed.SDS-PAGE and Western-blotting assays demonstrated the expressed protein was about 38 ku.After purifying and renaturating, the antiviral activity of IFN was evaluated by using vesicular stomatitis virus(VSV) and had an antiviral specific activity of 5.52×10³ U/mg, which Showed that the recombinant protein had a good antivital activity.

Key words: Tianfu goose, IFN-α, prokaryotic expression, antiviral activity, VSV

中图分类号:

S835

刘菲, 高丽芹, 程安春, 汪铭书, 韩清林, 赵婷婷, 唐卫杰, 严晓玲. 天府肉鹅IFN-α成熟肽基因的原核表达及抗病毒活性[J]. 四川农业大学学报, 2011, 29(02): 269-273.

LIU Fei, GAO Li-qin, CHENG An-chun, WANG Ming-shu, HAN Qing-lin, ZHAO Ting-ting, TANG Wei-jie, YAN Xiao-ling. Prokaryotic Expression of Tianfu Goose IFN-α Mature Peptide and its Activity Against Virus[J]. jsau, 2011, 29(02): 269-273.

[1]	林霄, 贺煜, 程安春, 汪铭书, 贾仁勇, 朱德康, 刘马峰, 杨乔, 吴英, 赵新新, 张沙秋, 黄娟, 刘韵雅, 张玲, 潘磊昌, 欧旭敏, 毛塞, 陈舜. 鸭坦布苏病毒NS3蛋白的原核表达及其多克隆抗血清的制备[J]. 四川农业大学学报, 2020, 38(05): 619-623.
[2]	刘裕峰, 朱天辉, 刘应高, 谯天敏, 李姝江, 龙旭梅, 韩珊. 板栗过氧化氢酶基因CmCAT的克隆与原核表达[J]. 四川农业大学学报, 2019, 37(02): 168-176.
[3]	阳明贤, 左之才, 李碧, 王宇. 牛抵抗素克隆及高效可溶性表达研究[J]. 四川农业大学学报, 2018, 36(06): 802-807.
[4]	李青青, 张润敏, 石冠蓝, 姚攀锋, 王晓丽, 李成磊. 苦荞黄酮醇合酶基因FtFLS4的克隆及其在大肠杆菌的表达[J]. 四川农业大学学报, 2018, 36(05): 611-617.
[5]	张烨, 赵术珍, 王江山, 夏晗, 侯蕾, 任丽, 王兴军. 花生光敏色素AhphyA和AhphyB基因的克隆及原核表达研究[J]. 四川农业大学学报, 2015, 33(01): 13-21.
[6]	徐黎黎, 钟美玉, 李伟, 魏育明. 阿拉拉特小麦高分子量谷蛋白新基因1Gy的克隆及序列分析[J]. 四川农业大学学报, 2011, 29(02): 141-146.
[7]	李安明, 邓青云, 李德华. 长喙田菁植物螯合肽合成酶PCS1的原核表达及纯化[J]. 四川农业大学学报, 2011, 29(02): 213-217.
[8]	陈红英, 崔沛, 崔保安, 胡功政, 朱前磊, 王子馨. 罗曼鸡白细胞介素18基因的克隆、表达及生物学活性检测[J]. 四川农业大学学报, 2009, 27(02): 218-222.
[9]	宋振辉, 郭万柱, 韩国全, 骆爱芳. 猪传染性胃肠炎病毒SC-Y株N基因的克隆及原核表达[J]. 四川农业大学学报, 2006, 24(02): 210-213.

天府肉鹅IFN-α成熟肽基因的原核表达及抗病毒活性

Prokaryotic Expression of Tianfu Goose IFN-α Mature Peptide and its Activity Against Virus

PDF (PC)

赞

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 9

Metrics

本文评价

推荐阅读 0